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冷凍細(xì)胞

1.你們提供冷凍細(xì)胞系嗎？

目前，我們不提供冷凍細(xì)胞，也沒有冷凍細(xì)胞的協(xié)議。您可以要求將閃存凍結(jié)作為一種自定義選項(xiàng)，以收取額外的處理費(fèi)。

分解

2.海馬或皮層細(xì)胞的生存能力是否取決于解離的方法？你喜歡機(jī)械解離還是酶解離？

是的，木瓜蛋白酶可以獲得更高的活產(chǎn)率（參見J Neurosci Meth 71:143），但表面蛋白的消化是不可避免的。在短期內(nèi)（不到4天），這是一個(gè)令人擔(dān)憂的問題。從長(zhǎng)遠(yuǎn)來看，這可能并不重要。使用火拋光的9英寸玻璃移液管可獲得更高的生存能力，而使用藍(lán)色塑料移液管端可獲得更低的可見性。對(duì)于E18組織，為了快速和簡(jiǎn)單，我們使用了機(jī)械。

3.你用酶來制備皮層培養(yǎng)物嗎？

為了獲得更高的產(chǎn)量，我們使用在不含B27®的Hibernate®E-Ca中稀釋的2mg/mL木瓜蛋白酶溶液。該溶液應(yīng)在30攝氏度的水浴中培養(yǎng)10分鐘。不應(yīng)向該溶液中添加EDTA、巰基乙醇或半氨酸HCl等其他化學(xué)物質(zhì)。有關(guān)更多信息，請(qǐng)參閱我們的初級(jí)神經(jīng)元細(xì)胞培養(yǎng)方案。

4.為什么您推薦不含B27®的Hibernate®E-Ca與木瓜蛋白酶進(jìn)行最佳解離？

鈣能促進(jìn)粘附。因此，去除鈣可以促進(jìn)神經(jīng)元的解離。為了提供細(xì)胞粘附蛋白作為木瓜蛋白酶的主要底物，省略了B27®，這樣B27®中的蛋白質(zhì)就不會(huì)競(jìng)爭(zhēng)底物。

文化

1.原代細(xì)胞會(huì)增殖嗎？如果會(huì)，你能將它們傳代多少次？

原代細(xì)胞不增殖，不應(yīng)傳代。如果傳代，只有30%的細(xì)胞存活，并且細(xì)胞不能再次傳代。

2.你知道每小瓶組織能提供多少星形膠質(zhì)細(xì)胞嗎？

星形膠質(zhì)細(xì)胞的數(shù)量是細(xì)胞數(shù)量的20%。當(dāng)生長(zhǎng)神經(jīng)元培養(yǎng)物時(shí)，不含血清的培養(yǎng)基（NbActiv1™) 用于培養(yǎng)少于2%的星形膠質(zhì)細(xì)胞。這抑制了沒有AraC的神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng)。當(dāng)生長(zhǎng)星形膠質(zhì)細(xì)胞時(shí)，培養(yǎng)基中含有血清（NbAstro™ - Neurobasic®/馬血清/氨酰胺最大殘留量™) 可用于使星形膠質(zhì)細(xì)胞在1.5至2周內(nèi)匯合。

3.什么時(shí)候應(yīng)該添加AraC作為星形膠質(zhì)細(xì)胞有絲分裂抑制劑？

在Neurobasic®/B27®/GutaMAX中™ 我們推薦的培養(yǎng)基，您根本不需要添加AraC。該培養(yǎng)基不像血清那樣人工刺激星形膠質(zhì)細(xì)胞增殖。

4.星形膠質(zhì)細(xì)胞是否增殖？如果增殖，它們可以傳代多少次？

星形膠質(zhì)細(xì)胞確實(shí)會(huì)增殖并且可以傳代。我們的E18星形膠質(zhì)細(xì)胞可以成功傳代4-5次。

5.海馬神經(jīng)元什么時(shí)候表現(xiàn)出興奮性毒性？

據(jù)我們所知，乙酰堿在任何年齡都是無毒的。

從E18海馬培養(yǎng)7天開始，氨酸的毒性最大。皮質(zhì)神經(jīng)元可能提前1或2天。

6.我的文化被污染了。它們一開始看起來很好，但現(xiàn)在介質(zhì)是多云的黃色，有許多1-3微米長(zhǎng)的相暗體。

至少有5種可能的污染源（假設(shè)培養(yǎng)箱中的其他培養(yǎng)物沒有被污染，并且培養(yǎng)箱底部的加濕水是干凈的）：

培養(yǎng)皿本身可能是污染源。為了排除這種情況，將新鮮過濾的培養(yǎng)基加入另一個(gè)培養(yǎng)容器中。如果介質(zhì)變黃或渾濁，則容器受到污染。

粘性基材。這很常見。您可以將新鮮過濾的培養(yǎng)基放在準(zhǔn)備好的基質(zhì)上，以尋找這種污染源。

培養(yǎng)基本身或其中一種添加劑（如氨酸鹽）。這很常見。請(qǐng)確保在您的介質(zhì)的未涂覆井中進(jìn)行單獨(dú)的測(cè)試，并由我們提供。

看似隨機(jī)或低水平的污染可能來自于朝著開放文化的方向說話甚至呼吸。此外，無菌罩和培養(yǎng)箱之間的空氣不是無菌的，大多數(shù)培養(yǎng)容器都沒有密封。如果從罩子到培養(yǎng)箱有很長(zhǎng)的距離，你可以把培養(yǎng)物放在用70%乙醇沖洗過的塑料食品容器里。

組織。盡管我們對(duì)我們提供的培養(yǎng)基進(jìn)行無菌測(cè)試，但組織本身無法進(jìn)行測(cè)試。如果您能提供證據(jù)證明您的組織按時(shí)到達(dá)，并在使用前儲(chǔ)存在4攝氏度，并且排除了上述4種可能性，請(qǐng)致電我們進(jìn)行一次性更換。通常，我們的經(jīng)驗(yàn)是，您的樣本是本周我們所有貨物中一被污染的樣本，所以請(qǐng)理解我們需要進(jìn)行上述測(cè)試。

7.我想知道你能不能給我建議，我需要培養(yǎng)多少細(xì)胞才能獲得足夠的蛋白質(zhì)來進(jìn)行幾次蛋白質(zhì)印跡？即，多少個(gè)細(xì)胞等于20-50微克的蛋白質(zhì)？

根據(jù)Patel和Brewer（2003）的研究，在培養(yǎng)基中生長(zhǎng)一周的18000個(gè)細(xì)胞中，每個(gè)細(xì)胞含有大約6μg的蛋白質(zhì)。因此，3000個(gè)細(xì)胞/ug蛋白質(zhì)。需要大約50g蛋白質(zhì)的蛋白質(zhì)印跡提取物將需要大約150000個(gè)細(xì)胞。

排序

1.如何下采購(gòu)訂單？

可以使用我們的網(wǎng)站下單。創(chuàng)建帳戶后，您可以通過采購(gòu)訂單或信用付款。

2.您的付款條件是什么？

Transnetyx Tissue的標(biāo)準(zhǔn)付款條件是凈30。

3.你們有多單位折扣嗎？

是的，我們的一些目錄有多單位折扣。要獲得折扣，商品必須同時(shí)發(fā)貨。

4.你們的運(yùn)輸時(shí)間表是什么？

我們可以在收到訂單后24小時(shí)內(nèi)發(fā)貨。E18和成年大鼠和小鼠組織在周二、周三和周四發(fā)貨。周一至周四運(yùn)送媒體和其他物資。對(duì)于定制或特殊訂單項(xiàng)目，我們需要2-3周的訂單交付時(shí)間。

5.你們?cè)趪?guó)際上發(fā)貨嗎？

Transnetyx Tissue通過聯(lián)邦快遞提供國(guó)際貨運(yùn)服務(wù)。如果您的公司有聯(lián)邦快遞賬戶，他們想收取運(yùn)費(fèi)、關(guān)稅和稅款，請(qǐng)?jiān)谟唵紊献⒚?。否則，運(yùn)費(fèi)和關(guān)稅將包含在您的發(fā)票中。

所有國(guó)際貨運(yùn)安排在周一的Media或周二的Tissue。這樣可以留出通關(guān)時(shí)間。請(qǐng)至少提前一個(gè)工作日提交訂單，以適應(yīng)此運(yùn)輸時(shí)間表。請(qǐng)確保提交任何特定于您所在國(guó)家的海關(guān)文件。我們只提供標(biāo)準(zhǔn)的海關(guān)文件，對(duì)因文書工作不足而造成的海關(guān)延誤不承擔(dān)責(zé)任。

其他

1.我是否應(yīng)該意識(shí)到任何道德問題？

目前的程序由機(jī)構(gòu)動(dòng)物使用和護(hù)理委員會(huì)批準(zhǔn)。